LC/HPLC液相層析儀校驗

1.儀器外部功能檢查

目的：儀器單元外在環境、電源鈕、電壓鈕、插座、保險絲、接地線和面板等功能檢查。

目標：適合儀器單元運作之外在環境下，儀器單元可如預期正常運作。

試驗方法及記錄：
a.檢查外在環境之溫度及溼度。
b.以校正過之電表測試供應儀器單元之電源。
c.測試儀器單元外部各按鈕之功能。
d.合格標準：儀器單元可正常運作。


2.軟體功能驗證

目的：測定儀器單元軟體功能是否可如預期之運作。

目標：儀器單元軟體功能可如預期之運作。

試驗方法及記錄：
a.啟動儀器單元軟體。
b.進入單元軟體中改變各相關參數。
c.合格標準：觀察儀器單元如預期動作。


3.溶媒輸送系統之流量準確度校驗

目的：測定溶媒輸送系統流量的準確度。

目標：測定溶媒輸送系統所輸出之溶媒體積是否和設定值一樣，以免造成日後分析結果中之滯留時間的不準確。

試驗方法及記錄：
a.準備100%H2O（HPLC級）、校正過的計時器與天平、收集用之量筒或稱量瓶（已秤重）及背壓調節器或限制圈環。
b.設定流速並同時啟動計時器，以驗證溶媒輸送系統流量的準確度。
c.格標準：0.95~1.05ml/min。


4.溶媒輸送系統之流量精密度校驗

目的：測定溶媒輸送系統流量的精密度。

目標：測定溶媒輸送系統所輸出之溶媒體積之精密度(再現性)是否符合和預期規格一樣，以免影響日後分析結果中滯留時間再現性。

試驗方法及記錄：
a.準備100%H2O（HPLC級）、校正過的計時器與天平、收集用之量筒或稱量瓶（已秤重）及背壓調節器或限制圈環。
b.設定流速並同時啟動計時器，以驗證溶媒輸送系統流量的準確度。
c.合格標準：RSD≦1%。


5.梯度溶媒輸送系統之流量準確度校驗

目的：測定溶媒輸送系統溶媒梯度變化之準確度。

目標：測定溶媒輸送系統所輸出之梯度溶媒變化是否和設定值一樣，以免造成日後分析結果的不準確。

試驗方法及記錄：
a.準備100%H2O（HPLC級）此為A溶媒，另準備0.5%AcetoneSolution此為B溶媒。
b.依梯度溶媒程式設定，改變A溶媒與B溶媒之比例。
c.啟動積分軟體並蒐集訊號改變之資料並計算之。
d.合格標準：設定值±5%


6.檢測器之雜訊校驗
目的：確定紫外光可見光檢測器之雜訊變化在符合標準的範圍內。

目標：雜訊為當沒有樣品通過檢測器時，檢測器訊號值在一短暫時間的改變量，雜訊值將影響偵測及定量的最小值。此驗證目標在確定檢測器的雜訊現象在標準範圍內，以免影響定量分析之準確性及精密度。

試驗方法及記錄：
a.開機約一小時，待儀器暖機穩定後，溫度變化小於1℃且基線穩定時，以單波長頻道記錄雜訊值。
b.當達至準備狀態後，將系統啟動自動歸零的動作，並觀察輸出訊號值5分鐘，於變化值小於0.001AU時，便將基線雜訊結果記錄並列印。
c.合格標準：3×10-5AU


7.檢測器之飄移校驗

目的：確定紫外光可見光檢測器之飄移程度在符合標準的範圍內。

目標：飄移為當沒有樣品通過檢測器時，檢測器訊號值在一長時間的改變量，亦會影響到偵測極限與定量，及檢測器長時間操作的能力。此驗證目標在確定檢測器的飄移現象在標準範圍內，以免影響定量分析之準確性及精密度。

試驗方法及記錄：
a.開機約一小時，待儀器暖機穩定後，溫度變化小於1℃且基線穩定時，以單波長頻道記錄雜訊值。
b.當達至準備狀態後，將系統啟動自動歸零的動作，並觀察輸出訊號值30分鐘，於變化值小於0.001AU時，便將基線雜訊結果記錄並列印。
c.合格標準：5×10-3AU/hr


8.檢測器之波長準確度校驗

目的：確定紫外光可見光檢測器之波長準確度。

目標：波長準確度是區分不同光譜最重要之指標，準確的波長可以提供較好的靈敏度及選擇性，故需確定檢測器之波長準確度，以免影響定量及定性分析之準確性。

試驗方法及記錄：
a.開機約一小時，待檢測器暖機穩定後，以H2O（HPLC級）穩定系統，之後轉換為丙酮溶液，並記錄於不同波長下之吸收值，驗證檢測器之波長準確度的範圍。
b.合格標準：263.83±2nm。



9.自動注射器功能鍵檢查

目的：儀器單元外在環境、電源鈕、電壓鈕、插座、保險絲、接地線和面板等功能檢查。

目標：適合儀器單元運作之外在環境下，儀器單元可如預期正常運作。

試驗方法及記錄：
a.檢查外在環境之溫度及溼度。
b.以校正過之電表測試供應儀器單元之電源。
c.測試儀器單元外部各按鈕之功能。
d.合格標準：儀器單元可正常運作。


10.軟體功能驗證

目的：測定儀器單元軟體功能是否可如預期之運作。

目標：儀器單元軟體功能可如預期之運作。

試驗方法及記錄：
a.啟動儀器單元軟體。
b.進入單元軟體中改變各相關參數。
c.合格標準：觀察儀器單元如預期動作。


11.自動注射器之取樣精密度驗證

目的：量測自動注射器之取樣精密度。

目標：自動注射系統精密度定義為樣品溶液體積注射進高效能液相層析系統的再現性。

試驗方法及記錄：
a.開機約一小時，待檢測器暖機穩定，以100%H2O（HPLC級）沖洗系統，直到整個系統穩定平衡穩定（約需20分鐘），並將檢測器設定於波長264nm，以自動注射系統連續注入0.5%Acetone4次，注射體積20μL，記錄樣品溶液體積注射進高效能液相層析系統的精密度。
b.合格標準：＜2％。


12.自動注射器之樣品滯留體積驗證

目的：量測自動注射器之滯留體積。

目標：自動注射系統滯留體積定義為注射樣品之殘留量。本驗證目標為量測注射體積之負載量。

試驗方法及記錄：
a.自動注射精密度測試結束後，待整個系統穩定平衡穩定（約需20分鐘），將檢測器設定於波長264nm，注入空白樣品，記錄注射樣品之殘留量。
b.合格標準：＜0.5％。


13.自動注射器之注射線性驗證

目的：量測自動注射器之注射線性。

目標：自動注射系統線性定義為樣品溶液體積注射進高效能液相層析系統的線性。

試驗方法及記錄：
c.開機約一小時，待檢測器暖機穩定，以100%H2O（HPLC級）沖洗系統，直到整個系統穩定平衡穩定（約需20分鐘），並將檢測器設定於波長264nm，以自動注射系統連續注入0.5%Acetone，注射體積分別為5μL、10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、，記錄並計算樣品溶液體積注射進高效能液相層析系統的線性。
d.合格標準：R2＞0.990。


14.分液收集器之開關功能驗證

目的：本驗證之目的在於，確定按鍵及各應用軟體之操作是否能正常發揮功能。

目標：觸動按鍵或進入各應用軟體時，能得到應有之反應、回饋，若發現有異常時，應洽維護公司予以調整或維復。

試驗方法及記錄：
以手動方式按觸面板按鍵，以目視方式檢查是否得到應有的反應。


15.分液收集器定位驗證

目的：測定收集位置的正確性。

目標：測定收集器開始收集位置是否和設定值一樣，以免造成日後樣品收集的錯誤。

試驗方法及記錄：
a.準備試管
b.將試管放入收集器內，設定收集器收集位置，觀察收集位置是否正確。


16.分液收集器時間準確度驗證

目的：測定取樣時間的準確度。

目標：測定收集器開始收集義也的時間是否和設定值一樣，以免造成日後樣品收集的不準確。

試驗方法及記錄：
a.準備校正過的計時器
b.將收集器設定每三分鐘收集一次，每次收集1分鐘，須同時啟動及停止碼錶與收集器，測量三次，將結果填入附表O6-1.中。
c.合格標準：準確度在＜5%。