光度計總兒茶素類含量測定

分光光度計總兒茶素類含量測定方法壹、試劑配製：
一、 4﹪香草醛 Vanillin Solution： 
1. 秤取4g Vanillin（試藥級）將之溶解於100mL甲醇中，冷藏保存於褐色瓶中。
2. 未使用完的試藥，封蓋後儲存於乾燥恆溫的處所（防潮箱）。
 
二、 兒茶素 Catechin標準溶液： 
1. 精準秤取30mg（+）-Catechin（試藥級），以蒸餾水定量至100mL。
2. 以Catechin 溶液依不同比例配製成不同濃度標準液。
 

標準濃度	Catechin 溶液（mL）	蒸餾水（mL）
0.0030	10	0
0.0024	8	2
0.0018	6	4
0.0012	4	6
0.0006	2	8
0.0000	0	10

 
3. 未使用完的試藥，封蓋後儲存於乾燥恆溫的處所（防潮箱）。

 
貳、 校正曲線：（本步驟反應受光線影響，需作避光措施）
一、 取不同濃度標準液1mL置於試管中，並標示記號。
二、 各管加入5mL 4﹪香草醛溶液。
三、 各管以自動分注器，注入3mL 濃鹽酸，並充分混合。
四、 靜置15分鐘。
五、 以分光光度計測定其在波長500nm之吸光值，並記錄之。

 
參、 茶湯萃取：
一、 震盪水浴槽加水預熱至80℃，測量用之水銀溫度計需定時校驗。
二、 秤取1.0g茶葉置於250mL錐形瓶中，標示編號並記錄重量。
三、 錐形瓶中加入85℃熱水（蒸餾水or 逆滲透水）75mL、立即放入震盪水槽，水浴槽內水面高度需略高於錐形瓶內液面高度，以轉速80rpm、溫度80℃的條件萃取30分鐘，30分鐘後立即取出。
四、 將錐形瓶中茶湯以15mesh篩網過濾，並以少量RO水rines錐形瓶兩次，再以少量RO水rines篩網，避免殘留萃取液附著於瓶壁及篩網上影響檢測結果。
五、 濾液回複室溫後倒入100mL定量瓶中，加RO水定量至100mL，定量後倒入錐形瓶中封口備用，若不立即進行分析則需冷藏保存。
六、 茶湯檢測前需搖晃均勻且回複室溫，後以濾紙過濾茶湯待檢。
七、 分析時使用之檢測樣品，需以上述濾液進行。
八、 茶湯濃度計算： 

茶湯CONC.（﹪）＝	茶葉重量（g）	×100＝（）﹪
	最終定量體積（mL）

肆、 總兒茶素分析（本步驟反應受光線影響，需作避光措施）
一、 取茶湯濾液1mL，以10mL定量瓶加RO水定量至10mL。
二、 取1mL稀釋茶湯濾液，放入試管中。
三、 加入5mL 4﹪香草醛。
四、 以分注器加入濃鹽酸3mL，充分混合。
五、 於暗箱中靜置15分鐘。

 
伍、 儀器操作
一、 開啟Metertech SP-800系列可見光-分光光度計及印表機電源
二、 待分光光度計自我檢測完畢後，於鍵盤上輸入500，後按下 “ENTER” 完成波長設定。
三、 取RO水3mL注入比色皿，並將之放入比色槽中，按下 “Blank” 鍵，進行歸零。
四、 歸零完成後，進行檢測樣品吸光值讀取，並按下 “PRINT” 鍵進行紀錄。
五、 待檢驗完成後，經由校正曲線求出樣品兒茶素濃度。

 
陸、 檢測結果計算 
一、 校正曲線
1. 將標準品數據輸入軟體進行計算
2. 完成標準曲線後，檢視回歸曲線數值，若大於99.5﹪，則數據組不予採用，需重作標準曲線步驟，直到合乎標準為止。
 
二、 濃度計算
1. 將列印所得數據填入計算軟體內，計算總兒茶素濃度。
2. 最終依規定製作檢測報告。